包裝:20*100ul 100*100ul
產品介紹:Mach1-T1 菌株由野生型 non-K-12 E. Coli W 菌株改造而來,
是目前生長速度較快的感受態細胞之一,在 平板上 9 h 可見
克隆,缺失核酸內切酶 (endA),提高了質粒 DNA 的產量和質
量;重組酶缺陷型 (recA1398)減少插入片段的同源重組概率,
保證了插入 DNA 的穩定性;lacZ M15 的存在使 Mach1-T1 可
用于藍、白斑篩選;tonA 突變賦予 Mach1-T1 菌株對噬菌體
T1 和 T5 的抗性。
Mach1-T1 感受態細胞 經特殊工藝制作,pUC19 質粒檢測轉化
效率>5x108 cfu/μg DNA。
操作步驟:
1.Mach1-T1 感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌塊
融化,加入目的 DNA(質粒或連接 產物)并用手撥打 EP 管底
輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置 25 分鐘。
2.42℃水浴熱激 45 秒,迅速放回冰上并靜置 2 分鐘,晃動會
降低轉化效率。
3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌2YT 或 LB培養
基,混勻后 37℃,200 rpm 復蘇 60 分鐘。
4.5000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹
打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 2YT 或 LB 培養基上。
5.將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選
操作,將平板放 37℃培養至少 13 h。
注意事項:
1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內加入目
標 DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間 存放會降低轉化效
率。
2.混入目的 DNA 時應輕柔操作。
3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于
涂板的菌量。